请列举三种蛋白质分子量的测定方法,并简述其原理。
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测定蛋白质分子量的方法很多,例如渗透、折散速率,沉降分析等,我们这里简单地介绍几种分子量的测定方法。(1)沉降法:又叫超速离心法,蛋白质溶液经高速离心时,由于比重关系,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比,利用m=RTS/D(1--Vρ)即可求出其分于量m来自。(2)凝胶过滤法:又称分子排诗请市克丝岁创胞阻层析或分子筛层析法,此法是在层析柱中装入葡聚糖凝胶,这种凝胶颗粒中具有大量微孔,这些微孔只允许360问答较小的分予进入胶粒,而大于胶粒微孔的分子则不能进入而被排阻。当用洗脱液洗脱时,被排阻的分子质量大的蛋白质先被洗脱下来,分子质量小的后下来,根据待测样品的洗脱体积可以求出其分子量。(3)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法:蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶中电泳的速度取决于分子质量的大小,根据蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系,可以求出蛋白质分子量。
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