蓝白斑筛选的原理是什么？

蓝白斑筛选的原理是什么？

一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。

这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖来自苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整360问答近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色开德此约训要爱菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

缺点

由于多种原因，一些白色菌落可能不包含所需的重组质粒月逐丝胶须作胶选且粮。连接的DNA可能不是正确的或未正确连接便送案兵风义的，并且某些线性化载体可能被换依等开盐转化，其末端“修复”并连接在一件架担质进妈弦要回放起，从而不会产生LacZα，也不会形成蓝色菌落。

突变也会导致α片段不被快妒根喜才斯困争今表达。完全没有载体的菌落也会出现白色，有时可能会在抗生素后显示为卫星菌落已用完。

蓝色菌落也可能包含插入物。当插入片段与Lac查语映Zα基因“符合读框”且插入片段中不存在终止密码子时，就会发生这种情况。

以上内容参考 百度百科-蓝白斑筛选