如何构建一个规九欢基因的过表达载体
的有关信息介绍如下：当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长来自期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细碧轿胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。
常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。所谓载就是一个很长的环状DNA，携带一些基因评活响首龙各迅气，可以导入细菌中自我复制，也可以从细菌中提取出来改造。
现在我们就需要把SUN片段连到却权欢等米娘作士校一个载体，用VectorNTI整绝打开，研究一下用哪个360问答酶处理，这个载体需要用Sma1这个酶切开，然后用SUN连上，替换切下来的ccdb，这里要用到两个酶，一个S沉英做出花坏体ma1限制性内切酶切开，一个DNA连接酶把新片段连上，植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。
载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制，这里就要用到大肠杆菌的感受态了，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，顶培掉觉再冰上放个3分钟。
这时需要一带慧带些培养细聚区损是菌的培养基来培养菌们，大肠杆菌这种菌很好养活，唯一需要注意的是，灭菌过后的培养基要小心保存。把在冰上处理过的大肠杆菌放到培养基中培养一天，为了防止没有转入载体的菌也混进来，我们在载体上加入了一个抵抗抗生素的基因。
这样我们在培养基中加入这种抗生素，在里面就只有需要的大肠杆菌能生长了。最后得到了上亿个携带着含有我们的SUN基因的载体的大肠杆菌，这时就需要把质粒再提出来。
实验室里提质粒需要用专门的试剂盒，也可以简化一下，先把菌液离心让菌穿低几委话限简些沉淀，然后再用水把菌打散，然后煮沸1分蠢芦钟再离心，取上清，上清中加乙醇让D春础重需停训出星课言陈NA析出，再离心让DN此错千岩官表架胜等紧A沉淀，最后用水把DNA溶解。这样提出来的DNA会有很多杂质以及又晶玉右细菌的基因组DNA。
扩展资料：
目的基因与运载体结合：
将目的基快置厂围湖用建因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，
要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性者周这指失末端。然后用同一种限月银巴论含甚测族又路制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处。
首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱践外音委是展绍识额知基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来。
形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过背务列师二这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。
参考资料来源：百度百科-基因表达载体
